如何做好免疫组化染色

1、烤片、脱蜡：65℃烤箱烘烤1h(冬季可多考30min)，常规脱蜡、复水，放入水中浸泡5min。

2、抗原修复。配置：3g柠檬酸三钠+RO水至900ml,调PH=6，加水至1000ml。微波炉加热，高火10min(用保鲜膜盖上，记得打孔出气），将片子放入沸腾的水中浸没，放至自然冷却。

3、封闭、孵一抗。将冷却的片子取出，用油笔或石蜡化圈，不要碰到组织。分别缡蜍戆仳滴加100ul左右3%H2O2封闭液（覆盖组织），放至10min,PBS洗3次*3min，滴加5%BS帆歌达缒A孵育10min，倾去液体（不洗）滴加一抗，4℃放至过夜。

4、孵二抗、显色、复染。将片子取出，PBS洗3次*3min，滴加二抗+HRP，3蚀卺垦肝7℃放置1h，取出片子，PBS洗3次忮氽阝另*3min，滴加显色剂镜下显色（最好选取模型组摸出适当的显色时间，后面采用同样时间显色），待显色完成，PBS洗3次*3min,用苏木素进行复染20s,自来水洗3min。

5、脱水、封片、拍照。100%乙醇脱水1min，晾干，二甲苯透明10min，晾干，中性树胶封片。完成过后，第二天即可进行拍照处理，可用ImageJ、ipp等软件分析。