Everlab云端实验室:小麦黄化苗总DNA的提取
1、称取0.1g小麦黄化苗叶片于预冷的研钵中,加入3倍体积(W/V,约300μl) 提取缓冲液,在冰盘上研磨。
2、研碎后转入一EP管中,再加约300μl提取缓冲液。
3、加入20%SDS至终浓度为2%,约 66μl。
4、轻轻混匀后于65℃水浴,10min。
5、加入1/10体积的5mol/L醋酸钾(约66μl),于水浴中反应 30min。
6、离心(15krpm,10min,4℃)。
7、取上相转入一新的EP管中,用等体积的酚/氯仿/异戊醇(25:24:1)抽提一次(上下晃动几次即可)。
8、离心(12krpm,10min,20℃)。
9、取上相转入一新的EP管中,加入等体积的异丙醇,于室温下反应5~10min,其间将管至少颠倒5次。
10、离心(15krpm,10min,4℃)。
11、弃上清液,用70%乙醇冲洗沉淀物,真空抽干或吹干,最后溶于1×TE中(约50μl)。
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