感受态细胞的制备方法与步骤

1、首先，细菌小量培养，从LB平板上挑取新活化的E.coli DH5a单菌落，接种于3~5ml LB液体培养基中，37"C 180r/min振荡培养过夜。

2、然后，进行扩大培养，取细菌悬液1ml,以1: 100的比例接种于100ml LB液体培养基中,37C振荡培养1~2h至Asoo=0.5左右。

3、然后，收集菌体，将培养液转人离心管中，冰上放置10min,然后4"C 5000r/min离心10min,弃上清加人1/ 10 体积(10ml)0~4C预锺蓝姨矿冷的无菌CaCl2(0.01mol/L)溶液轻轻悬浮细胞，冰上。

4、然后，CaCl2处理菌体，放置10min 后,4"C 5000r/m坡纠课柩in 离心10min,弃上清液，加人2000pl 预冷的无菌CaC12(O.0lmol/L)重新悬浮细胞，分装成100pl 备用。

5、然后，感受态细胞的收集与分装，加入1600pl 预冷的无菌CaCl2(O.01mol/L)和400pl 无菌的70%甘油轻轻悬浮细胞。

6、最后，进行长期保存，直接加保存液2ml,冰上放置几分钟后，分装成100pl小份，液氨速冻10min后，在-70C下保存备用。