Everlab云端实验室实验方法：叶盘转化法

1、取幼嫩健康的叶片，用蒸馏水冲洗一遍，70％乙醇洗45秒，0.1%升汞消毒6－8分钟，无菌水冲洗5次，无菌滤纸吸干水分。

2、将无菌叶片剪成份0.5cm×0.5cm的小块，叶片近轴面向下，接种在愈伤组织诱导或分化培养基上，预培养2－3天。

3、挑取一个单菌落根癌农杆菌，接种到20ml附加相应抗生素的YEB培养液中，在27℃恒温摇床上培养到OD值为0.6-0.8。取上桢郓羼抱述上培养物按1％－2％的比例，转入新鲜的无抗菌素的YEB培养液中，继续培养6小时，当OD值为0.2-0.5时即可用于转化。

4、在超净工作台上，将菌液倒入无菌小培养皿，从培养液中取出预培养的外植体，放入菌液中泡1－5分钟。取出外突迫眠走植体在无菌滤纸上吸去附着的菌液。然后接种在愈伤组织诱导或分化培养基（烟草的培养基为MS附加IAA0.5mg/L，BA2.0mg/L）上，28℃暗培养2－4天。

5、将经过共培养的外植体转移到加有选择压的脱菌分化和愈伤组织诱导培养基上。在光照的条件下，25℃进行选择培养。

6、选择培养2－3周后，外植体的转化细胞将分化出抗性不定芽，或者产生抗性愈伤组织。将这些抗性材料转移到相应继代选择培养基上，或者转入附加选择压的生长和分化培养基中，令其生长和诱导分化。

7、待不定芽长到1cm以上时，切下并插入含有选择压的生根培养基上进行根培养，两周左右长出不定根。