western-blot过程中的常见问题及解决方案

1、解决对策：

玻璃没有洗干净，应该洗得很干净

过硫酸铵和TEMED加量相对较多

加完试剂后应摇匀

1、解决对策：

避免玻璃边缘（与胶条接触处）破损

将两块玻璃板摆放对齐，底部处于同一平面

操作时将气泡完全排除

1、解决对策：

操作时将气泡完全排除

靠膜一侧的滤纸应铺平

1、解决对策：

优化一抗

提高一抗和二抗的稀释度

降低SDS-PAGE中蛋白的上样量

1、解决对策：

优化封闭液

优化洗涤缓冲液，增加洗涤次数

减少曝光时间

1、解决对策：

优化一抗

浓缩样品

选择更高灵敏度的发光液，如enlight等。