如何从土壤中分离纯化功能微生物

    土壤中的微生物种类不计其数，那么如何才能从无数的微生物中分离出我们想要的菌种。方法是大同小异，只是选用的筛选培养基不同罢了。下面以筛选具有解磷能力的菌种为例，来阐述微生物的分离纯化方法。

 1.培养基

（1）无机磷细菌固体培养基（以1000 mL计）

葡萄糖10 g，NaCl 0.3 g，MgSO4·7H2O 0.3 g，MnSO4·4H2O 0.03 g，Ca3（P O4）2 10 g，（NH4）2SO4 0.5 g，KCl 0.3 g，FeSO4·7H2O 0.03 g，酵母膏0.4 g，琼脂20 g，PH为7.0～7.5。（筛选用）

（2）牛肉膏蛋白胨培养基

牛肉膏0.5%，蛋白胨1%，NaCl 0.5%，琼脂2%，PH为7.2～7.4。（纯化用）

2.步骤

（1）分离

    将取来的土壤样品混匀，称取1.5 g样品置于试管中，用10 mL 蒸馏水制成菌悬液（用振荡器充分震荡），再采用倍倍稀释法制成浓度分别为10-3、10-4、10-5、10-6的菌悬液。取各个浓度的菌悬液0.1 mL分别涂布于无机磷固体培养基上面，每个浓度涂三个平板，涂布完成后将其在37 ℃下培养适当时间，待长出菌落。

（2）纯化（划线法）

   首先，在超净工作台中将接种针在火焰上烧片刻，挑取分离步骤中长出的菌落，像图中黑线所示划线。然后，将接种再在火焰上烧片刻，像图中红线所示划线，注意这时不要挑取菌落，并且红线的开头一横与黑线所示轨迹接触，而后面的折线轨迹则不再与黑线接触。最后，再在火焰上将接种针烧片刻，像图中蓝色轨迹划线，这时蓝线的第一横与红线接触，而后面的折线则不与红线和黑线接触。

   当然，像上图中划线完毕之后就把培养皿放在37 ℃下培养适当时间，让其长出菌落。为了达到理想的纯度，还应该将此步骤中得到的菌落再进行划线分离两三次。注意，这时挑取菌落应从蓝线区域长出的单菌落。

（3）菌种保藏

    将分离纯化得到的菌落，转接入试管中，待试管中长出菌落后，放入冰箱中保藏，以便后续研究。当然，为了进一步验证所得到的菌株为纯菌株，应该将试管中的菌落在无菌操作下挑取，进行革兰氏染色，在显微镜下观察，若细胞形态相似则为纯菌株，反之则反。

3.具体流程图