诱导重组质粒的表达方法

1、首先，先构建质粒的重组子，再将重组子转化到DNA中，再挑选单克隆并检测阳性菌送公同进行测序，将测序正确的菌株扩大培养并提质粒。

3、然后，调整原核细胞的表达条件，分别设置诱导温度为16°C、24'C、2呖分甾胗8C、33C、37*C和诱导时间(10h、2h、3h、4h、5h)及IPTG浓度(0.2mmol/L、0.4mmol/L、0.6mmol/L、0.8mmol/L、1.0mmol/L)进行摸索。

5、然后，进行目的蛋白大小的克隆，得到的Pm-cyclinY基因，可编码342个氨懋鲕壶迎基酸，预测分子量约为37.6kD,选用的帜咚两下酶切位点是XhoI和EcoRI，根据载体pET21a的质粒结构，从表达起始到目的片段F引物的XhoI位点，需要再加上约0.6kD,故此，目的片段约为38.2kD。