抗噬菌体菌株的筛选方法

1、首先，是固体法将生长成熟的敏感菌斜面，环刮下斜面上的菌体。将此菌液倒人灭菌荡3min，然后过滤制成菌悬液，控制其浓度为10的装有玻璃珠的三角瓶中，在摇床上振，加人10ml 灭菌生理盐水，用接种个/ml。取此菌悬液0.1ml和菌体液0.1mI(浓度107 个/ml以上)，同时加到牛肉膏蛋白胨平板上，使敏感菌浓度与噬菌体浓度比达1: 100 以上。

2、然后，用玻璃棒将平板上的菌液与嘴菌体液混合涂匀,于37C 下培养1~2d 并进行观察，如有少数细菌形成菌落，则这些西落有可能具有抗性。将这些菌落分别在加人0 1ml噬菌体液(浓度10个/罪焐芡拂ml)的平板上划线分离。反复进行几次，直至菌落生长正常，将筛选出的抗嘴菌体菌株保藏备用。为证实噬菌体是否与敏感菌起作用,在对照培养基上不加嘴菌体液而只加敏感菌液，以便统计死亡率。

3、然后，是液体法，将敏感菌悬液1mI(浓度为10 个/ml)和噬菌体液1ml(浓度107 个/ml以上)同时接种到牛肉膏蛋白胨培养液中，培养24 h后加入Iml浓度为10 个/ml的噬菌体液再继续培养。当培养液变清又重新变浑独后，再加噬菌体反复感染，培养一定时间后进行平皿分离，从中筛选出抗性菌株保藏备用。

4、然后，是诱变法，将敏感菌按常规紫外线诱变处理，然后取诱变后菌悬液0.2 ml 加到牛肉膏蛋白胨平板上，长出菌落后，用接种环挑取一环接种到加有0.1ml噬菌体液(浓度为107 个/ml)的斜面上，进行培养观察。如果斜面上不出现噬菌斑，菌苔生长良好，而对照菌落在同样的噬菌体液斜面上培养后出现噬菌斑甚至不长，则认为前者具有抗性。将这样的斜面挑选出来，分离纯化备用。这样，菌种不接触噬菌体，可以避免因此而产生溶源菌株。

5、然后，摇瓶发酵复筛，将用上述方法初步确定具有抗性的菌株接种到含有噬菌体液0.1ml(浓度为107 个/m)的摇瓶中发酵培养数天，测定其生物效价，同时接敏感菌对照摇瓶(加和不加噬菌体)。

6、最后，如果含有噬菌体液的摇瓶发酵单位不受影响,而敏感菌在含有噬菌体液的摇瓶中没有效价，则前者进一步被认为是具有抗性的。然后将效价高于对照菌株的原始斜面挑选出来留种。固体平板上噬菌斑检查，将上述经过复帝后挑送出来的抗性商林母瓶菌液a.5ml与浓度在10 个。