dsRNA细胞转染实验步骤

dsRNA细胞转染过程（24孔板）

1.提前1天细胞种植

1、贴壁细胞：提前一天将细胞种植在24孔板中，以转染时细胞汇合度（Confluence）在30％左右为宜，转染前全培养基总量为0.45ml。

2.转染过程

1、取1ug(50pmol)的dsRNA，加入一定量无血清稀释液，充分混匀，制成RNA稀释液，终体积为25μl。

2、取1.5ul的苇质缵爨Entranster-R4000，然后加入24ul无血清稀释液体，充分混匀，制成EntransterTM-R4000稀释液，终体积为25μl。室温静置5分钟。

3、将Entranster-R4000稀释液和RNA稀释液充分混合（可用振荡器振荡巡綮碣褂或用加样器吹吸10次以上）混合，室温静置15分钟。转染复合物制备完成。

4、将50μl转染复合物滴加到有0.45ml全培养基（可含10%血清和抗生素）的细胞上，前后移动培养皿，混合均匀。

5、转染后6小时观察细胞状态，如状态良好可不必更换培养基，继续培养24-96小时得到结果。