胎牛血清融化三步法

1、与4℃过夜法相比,三步法为什么对血清更好呢？重点有二！

其一：关系到沉淀出现的几率！

　　记得吗？血清在融化过程中，瓶子里冰块的底部你会看见亮亮的蛋白丝在下沉，如同蜂蜜溶于水时的亮线，这就是血清中大量的蛋白在快速融化，而水的熔点高于蛋白，融化的速度是比蛋白慢的。（回想一下高级冰淇淋和大棒冰的区别，你懂得！）试想，如果采用4℃过夜的方法迅恩，1瓶500毫升的血清融化好，大约需要10小时左右，蛋白先融化，沉降在瓶子的底部，水融化的速度比蛋白慢，于是造成大量蛋白溶于少量的水，此时就很容易有一些蛋白饱和析出，（大多是脂蛋白和纤连蛋白），这就是血清融化中产生沉淀的重要原因之一。

　　采用三步法，只要2.5个小时，温和有效地加快了水融化的速度，另一方面，融化过程中可以间断轻轻摇摆瓶子，让蛋白在瓶中混匀。此方法不但节约了时间，而且最大限度减少了血清沉淀出现的几率。

血清融化过程中，蛋白质会比水先融化。冰块底部亮亮的细丝就是融化中的蛋白

2、其二：血清在培养细胞中，最重要的是利用它的活性的因子，因此，融化过程中最大限度地保留因子的活性，就变得非常重要。回忆一下，细胞复苏时，要保持细胞的活性，我们是要遵循“快融”原则还是“慢融”原则呢？快融！血清同样如此！三步法需要两个半小时，4℃过夜需要大约10个小时（冰箱一般设2-8℃，所以各实验室融化时间会稍有出入）。哪个速度对保留活性更好？不言而喻！

3、融化血清第一步

　　    温度：室温

　案脂泛　    时间：100ml - 35分钟

　　    500ml - 90分钟

　　    1000ml - 100分钟

　　    或

　　    温度：15-20℃水浴（新接的自来水24℃上下）

　　    时间：100ml - 5分钟

　　    500ml - 18分钟

　　    1000ml - 20分钟

实验人员三步法化血清的图片，为了节约时间，实验人员采取的是第一步20℃水浴18min的方法。（用现接的自来水放入冰冻的血清，即册侵可达到20℃水浴的效果。一般实验室没有能制冷到20℃的水浴锅）

4、融化血清第二步

　　    温度：20℃水浴（新接的自来水24℃上下）

　　    时间：100ml - 15分钟

　　    500ml - 25分钟

　　    1000ml - 30分钟

5、融化血清第三步

　　    温度：37℃水浴

　　    时间：100ml - 20分钟

　　    500ml - 35分钟

　　    1000ml - 45分钟

第三步，将血清置于37℃水浴锅中进行融化，大约30nmin左右，血清就彻底融化，可以分装了。

6、图：大家看，使用三步法融化的血清十分清亮，养细胞的效果也是棒棒哒。