T淋巴细胞转化试验

1、小鼠脾细胞悬液的制备：取一个灭菌的平皿，加入5ml Hank’s液。颈椎脱臼法处死小鼠，取脾脏，放入平皿中，在钢网上研磨并过筛，制成细胞悬液。取出100μl用于计数。将其余细胞悬液移入一离心狃阝垮轹管中，离心1500rpm，7min，（或1000rpm，10min）弃去上清，用RPMI1640 培养液稀释，制成2.5×106 / ml的脾细胞悬液，然后加入ConA使每孔最终浓度为2μg/ml，同时做不加ConA的阴性对照孔。

2、将上述细胞悬液加入96 孔平底培养板中，每孔0.1ml。

3、将培养板放入含有5%CO2的37℃培养箱中培养48-72 小时，在培养结束前4颍骈城茇-6 小时，于培养板各孔内加入1mg/mlMTT液，10μl/孔。37℃培养6 小时。

4、各孔内加入0.01M 盐酸—异丙醇110μl，30 分钟内（或加2%SDS 100ul/孔，过夜）用酶标测定仪测OD 值，测定波长570nm。

5、实验结果将实验组和对照组三个复孔的OD 值平均。转化值=实验组的平均OD 值-对照组的平均OD 值。