样品采集与处理方法

1、首先，在感染实验开始后，于Oh, 3h,6h, 12h,24h,48h从各PHB浓度梯度的取样重复组中随机取虾3尾，  自对虾的头胸甲后插人围心腔取血淋巴液。

2、然后，加人等体积EDTA抗凝剂置于离心管中，4°C,8 000 r/min,离心10 min,取沉淀提取RNA。

3、然后，再提取RNA及cDNA合成，RNA提取采用Trizol法，cDNA合成使用PrimeScript'TMRT reagent   Kit with gDNA Eraser(TaKaRa)试剂盒进行。DNA提取及WSSV含罪肤荡量测定，取对虾肌肉组织提取DNA。

4、然后，再DNA经0.8%的琼脂糖凝胶电泳检测，要求不含大量蛋白质及降解的DNA片段。使用超微量紫外分光光度计(Biodropsis B0-2000)测定DNA含量及吸光度比值惹驾(要求在OD260 m/OD280 m=1.8- 2.0),在确保DNA质量的情况下。

5、然后，将溶液稀释至20 ng/pL, -80*C保存用于 Wssv含量检测。基因相对表达量测定，超氧化物歧化酶基因(sod),溶菌酶基因(lzm)和谷胱甘肽过氧化物酶基因(gsh-px)引物设计方法，抗菌肽基因(abp)引物设计。

6、最后，设计过氧化物酶基因(cat)引物序列根据，  NCBI CAT cDNA序列设计，18S引物序列设计，所有引罩久物均由生物技术合成，引物序列。