石蜡切片的制作步骤(附图)

2025-05-13 22:11:53

1、1.取材确定所取材料的来源及部位,纵切还是横切;取材要迅速,防止阻止发生进一步变化,材料体积要适宜。下图为植物芽体取样实拍。

石蜡切片的制作步骤(附图)

2、2.固定(1) 固定液的选择最常用的固定液为FAA(万用固定液)。它的优点是材料固定时间不受限制,固定时间短则数小时,长则数月或数年。(可做材料保存液傧韭茆鳟)配方: 50%或70%酒精 90ml 冰醋酸 5 ml 福尔马林 5 ml (柔软材料用50%酒精,坚硬材料用70%酒精配制)(2)材料固定后的处理冲洗或漂洗:组织固定后应充分水洗,除去留在组织内的固定液及其结晶沉淀,否则会影响以后的染色效果。(材料固定后,若暂时不能进行下一步操作,可于70%的酒精溶液或直接与FAA固定液中,于冰箱中4℃存放。)下图为固定液浸泡的组织切块。

石蜡切片的制作步骤(附图)

3、3.脱水目的:水和透明剂不能互溶,只有脱去水分后,才能让透明剂进入。试剂:梯度酒精溶液流程:70%---85%---95%--100%--- 100% 每步1h-2h左右。注意事项:保证脱水梯度和每一步脱水时间,水要完全脱净,但也不能过度脱水(过久使组织变脆、收缩,这个时间大家可以根据自己的实验来摸索一下,不必完全按照本操作来)。下图为自动组织脱水机,适于大量样品组织脱水用。如果材料体积及样品量较少可用小烧杯做容器来进行逐级脱水。

石蜡切片的制作步骤(附图)石蜡切片的制作步骤(附图)

6、6.切片传统的切片方法是将包埋好的蜡块用刀片修成规整的梯形,粘于小木块上,上机切片。新型的切片方法是将包埋框(见下图)代替木块的支撑作用,上机切片。切片的厚度可以根据自己的实验要求来确定,一般在8μm-20μm范围内。(下图为传统切片机与新型自动切片机)

石蜡切片的制作步骤(附图)石蜡切片的制作步骤(附图)

8、8.脱蜡与复水、染色脱蜡目的:干燥后的切片需脱蜡及复水才能在水溶性染液中进行染色。复水目的:脱蜡后的材料,如果不经过复水,直接进入染色剂中,材料将会严重变形,甚至难以悌灶燠唢染色。染色目的:使细胞组织内的不同结构呈现不同的颜色和足够强的差异以便于观察。总体流程:二甲苯→1/2 二甲苯+1/2纯酒精→100%酒精→95%酒精→85%酒精→番红(4h以上)→95%酒精→固绿(迅速)→95%酒精(迅速)→100%酒精→1/2 二甲苯+1/2纯酒精→二甲苯→二甲苯,以上各级约需5~10分钟,已注明时间的除外。染色剂:1%番红(85%酒精配制) 0.5%固绿(95%酒精配制)

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