hplc提高分离效果的方法

1、首先需要了解一下分离度的概念，分离度的公式如下图的公式：附上峰形图，可以更好的理解其中的表达式其中，tR1和tR2分别是峰1和峰2的保留时间；W1和W2分别是峰1和峰2在峰底（基线）的峰宽，即通过色谱峰的拐点所作三角形的底边长度。当R>1.5时，两峰可以完全分离。

2、提高分离度，即是提高分离度公式中R的值，从公式中可以看出，可以通过提高相对保留时间以及降低峰宽来实现，当然这只是理论方案，那么实际应用中如何实现呢?

3、一、相对保留时间取决于组分及色谱柱其固有的热力学性质，两组分的保留时间差异越大，即固定相对组分的选择性越高；而两峰底宽越窄，表示柱效越高。因此选择合适的固定相非常重要，可以达到提高分离度的效果，同时选择合适的流动相及流动相比例也可以提高分离效果。

4、二、增加柱温可以提高大多数情况下的分离效果。（注意不是所有都适用）

5、三、可以使用离子对试剂。用于分析电离能力较强的样品，其原理是将分析物上的离子进行结合，形成在色谱柱上有保留的分子。常用的离子对试剂有：用于酸性化合物的： 四丁基氢氧化铵、四丁基溴化铵、十二烷基三甲基氯化铵用于碱性化合物的： 戊烷磺酸钠、己烷磺酸钠、庚烷磺酸钠、辛烷磺酸钠、癸烷磺酸钠