间充质干细胞MSC酶消化培养方法

MSC牛壁咐孝酶消化培养方法:

1.准备足月生产胎儿的脐带要求孕期无任何不良疾病并且取得过程中在无菌条件下进行，将其浸入1%的双抗(请链霉素)DMEM迪舻闽裆培养基中，使用玻璃容器密封好运送至实验室；

2.获得的脐带置于生物安全柜中剪取10cm长度用生理盐水将其中的血污清洗干净；

3.任取脐带一端用解剖刀在离顶端1厘米处的圆周把外表皮划开，然后用夹子将其固定住，再取两把镊子用力将外表皮撕下，接下来再将两根动脉血管分离，最后将静脉内皮剔除；

4.分离干净的脐带按1mm²毫米大小剪碎成肉糜状，放入离心管内，加入20毫升100~200U200mgCollagenaseⅡ/ml的DMEM消化液再加入400ul500mg/ml的DNase溶液完全混匀后置于37℃环境下消化20小时，最后加入1%的HAase溶液37℃消化20分钟该过程要求控制PH值为7.5；

5.使用100~200目的滤筛将消化下来的其他组织滤除掉；

6.用生理盐水稀释消化液后的细胞，置于室温2500rpm的离心力下离心5分钟后收集细胞，完成后在观测上清中是否还有细胞，重悬细胞于完全培养基中并用细胞计数板计数；

7.获得的原代细胞接种于0.2%的明胶包被的培养瓶，然后放入环境为37℃、5%浓度二氧化碳培养箱中培养。

8.每天定时观测细胞的贴壁生长情况。

9.在大多数细胞贴壁后，将培养液全部换掉滤去杂志和不贴壁的细胞，以后按72~96小时的周期半量换液即可。